東寰淺談細胞凋亡的檢測方法

細胞生命的終結(jié)有許多種方式，凋亡只是其中一種，所以要確保自己檢測到的的確是凋亡信號。上海東寰為您分析細胞凋亡的檢測方法！

細胞凋亡的檢測方法也有多種，如形態(tài)學檢測、磷脂酰絲氨酸外翻分析（Annexin V 法）、線粒體膜勢能檢測、DN***斷化檢測、TUNEL 法及 Caspase-3 活性檢測等，可根據(jù)自己的實驗需求選擇合適的方法。這里我們主要了解 Annexin V 法。

Annexin V 是一種分子量為 35～36 KD 的豐富的胞內(nèi)蛋白。Annexin V 屬于 Ca2+ 結(jié)合蛋白家族，可與磷脂（PL）發(fā)生可逆的 Ca2+ 依賴性結(jié)合，對磷脂酰絲氨酸（PS）具有高親和力。在健康細胞中，PS 主要位于質(zhì)膜的胞質(zhì)側(cè)，而在早期凋亡細胞中，PS 從質(zhì)膜內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)至外側(cè)，Annexin V 與暴露在細胞外環(huán)境的 PS 結(jié)合。

核酸染料碘化丙啶（PI）及 7 氨基-放線菌素 D（7-AAD）均具有高 DNA 結(jié)合常數(shù)，它們不能透過正常細胞或早期凋亡細胞的完整細胞膜，但可以透過凋亡晚期和壞死細胞的細胞膜而使細胞核染色。因此，將 Annexin V 與 PI 或 7-AAD 聯(lián)合使用，可以將凋亡早、晚期的細胞以及死細胞區(qū)分開來。

Annexin V 可以與熒光素（FITC、PE）或 biotin 綴合，這種形式保留了 Annexin V 對 PS 的高親和力，因此可以用流式細胞術(shù)或熒光顯微鏡檢測細胞凋亡的發(fā)生。與 PI 不同，7-AAD 與 PE 和 FITC 的光譜重疊更小，因此，可以在多色分析中與 PE 和 FITC 標記的抗體聯(lián)合使用。

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