細(xì)胞凋亡的晚期檢測

  上期我們主要講解了細(xì)胞凋亡的早期檢測方法，這期主要講解一下細(xì)胞凋亡晚期中，核酸內(nèi)切酶（某些Caspase的底物）在核小體之間剪切核DNA，產(chǎn)生大量長度在180-200 bp 的DNA的片段。

  1、凋亡 DNA Ladder 檢測試劑盒 
       
  細(xì)胞經(jīng)處理后，采用常規(guī)方法分離提純DNA，進(jìn)行瓊脂糖凝膠和溴化乙啶染色，在凋亡細(xì)胞群中可觀察到典型的DNA ladder。Quick Apoptotic DNA Ladder Detection Kit可以快速（約1-2小時(shí)）、靈敏地檢測凋亡細(xì)胞中的DNA的片段。

  2、TUNEL-based DNA 的片段分析試劑盒 

  細(xì)胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3'-末端，從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測。Apo-BrdUTM分析使用2種顏色的TUNEL方法用流式細(xì)胞儀檢測凋亡細(xì)胞中DNA條帶。采用的BrdU比生物素標(biāo)記的或地高辛（digoxigenylated）標(biāo)記的方法靈敏度更高。

  3、Caspase分析試劑和試劑盒  

  Caspase在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著重要的作用，屬于天冬氨酸蛋白酶。其中caspase-3為關(guān)鍵的執(zhí)行分子，它在凋亡信號(hào)傳導(dǎo)的許多途徑中發(fā)揮功能。在正常狀態(tài)下，caspase家族都以無活性的酶原(30～50kD)形式表達(dá)，Caspase酶原由原結(jié)構(gòu)域、大亞基（～20kD）和小亞基(～10kD )構(gòu)成。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)caspase可以被蛋白酶裂解，大亞基和小亞基形成活化的caspase。一些caspase活化后可以次序激其他caspase形成caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，促發(fā)細(xì)胞凋亡。 

  以上就是細(xì)胞凋亡晚期的一些檢測，希望上海東寰分享的內(nèi)容能對大家有所幫助，想要了解更多，歡迎致電咨詢。