免疫熒光技術(shù)服務(wù)

免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescence technique）又稱熒光抗體技術(shù)，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展較早的一種。將抗原或抗體用熒光素進(jìn)行標(biāo)記，標(biāo)記的抗原或標(biāo)記的抗體與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng) 后，測(cè)定復(fù)合物中的熒光素，這種免疫技術(shù)稱為免疫熒光素技術(shù)。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)分直接法、夾心法、間接法和補(bǔ)體法。

免疫熒光技術(shù)服務(wù)

免疫熒光技術(shù)服務(wù)
（DH0014）

一、服務(wù)介紹
免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescence technique）又稱熒光抗體技術(shù)，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展*早的一種。將抗原或抗體用熒光素進(jìn)行標(biāo)記，標(biāo)記的抗原或標(biāo)記的抗體與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng) 后，測(cè)定復(fù)合物中的熒光素，這種免疫技術(shù)稱為免疫熒光素技術(shù)。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)分直接法、夾心法、間接法和補(bǔ)體法。

二、服務(wù)內(nèi)容及價(jià)格

服務(wù)編號(hào)	服務(wù)內(nèi)容	服務(wù)價(jià)格	服務(wù)周期（工作日）
DH0014-01	免疫熒光單標(biāo)記檢測(cè)	咨詢	咨詢
DH0014-02	免疫熒光雙標(biāo)記檢測(cè)	咨詢	咨詢

三、客戶提供
1、細(xì)胞株或細(xì)胞爬片。注：細(xì)胞爬片不宜太密；
2、熒光檢測(cè)所用的抗體
3、實(shí)驗(yàn)前，客戶需告知具體的細(xì)胞處理方式及詳細(xì)要求。
注：若有特殊處理的樣品，請(qǐng)盡可能出示相關(guān)材料（具有保密性的材料除外）。

四、服務(wù)流程
免疫熒光單標(biāo)記方法
免疫熒光單標(biāo)記是指只標(biāo)記一種蛋白質(zhì)分子，方法比較簡(jiǎn)單，只要按照染色步驟去做，通常不存在太多的問題。但要注意固定液的選擇，固定液選擇的合適與否，可能會(huì)直接影響染色結(jié)果。具體染色方法如下。
1、所需材料與試劑
a, 培養(yǎng)在蓋玻片或玻璃培養(yǎng)皿中融合程度達(dá)到60%-70%的細(xì)胞。
b, 一抗、FITC或TRITC標(biāo)記的二抗。
c, 4%多聚甲醛固定液或冷**固定液 (-20℃預(yù)冷20 min)。
d, 封閉液。
e, 0.01mol／LPBS緩沖液。
2、染色方法
a, 取出培養(yǎng)有細(xì)胞的蓋玻片，用0.01MPBS洗2-3遍。
b, 加入4%多聚甲醛試問固定30 min
c. 加入0.05%的Tritonx-100, 37℃, 5min，PBS洗兩次，5min/次
d. 加入含0.5%NS、1%BSA的PBS中室溫封閉30min-1h。
e. 去封閉液，直接加入一抗，37℃孵育1 h或4℃過夜?？贵w以0.01 mo/LPBS稀釋(理想的抗體濃度需經(jīng)試驗(yàn)而定)。
f. PBS洗三次，10min/次
g. 加入FITC-二抗或TRITC-二抗，37℃，孵育1h。
h. PBS洗三次，10min/次，用濾紙吸干。
i. 50%甘油(PBS配制)封片。
j. 免疫熒光顯微鏡下觀察，或于4℃避光保存。
免疫熒光雙標(biāo)記方法
免疫熒光的雙標(biāo)記是指同時(shí)標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)兩種蛋白質(zhì)分子，當(dāng)懷疑某種配體與已知受體結(jié)合后可用此方法加以證明。此方法稍微復(fù)雜一些，應(yīng)注意所用的一抗是來自不同種屬動(dòng)物的兩種特異性抗體(例如：A抗體為多克隆抗體，來自家兔；B抗體為單克隆抗體，來自小鼠)。其次，兩種二抗所帶熒光素的發(fā)射光不應(yīng)重疊，且盡量遠(yuǎn)離，通?？梢赃x擇FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5，或Cy3和Cy5等來組合。通常情況下，染色時(shí)兩種一抗可以同時(shí)孵育，然后可以同時(shí)孵育兩種二抗。但當(dāng)染色結(jié)果一種顏色非常弱，而另一種顏色比較強(qiáng)時(shí)，應(yīng)考慮先孵育顏色較弱的二抗。其他步驟同免疫熒光單標(biāo)記。

五、提交給客戶結(jié)果
基本實(shí)驗(yàn)步驟、藥品、樣品處理、圖片及圖片分析，熒光顯微鏡拍攝

六、服務(wù)項(xiàng)目說明
1.實(shí)驗(yàn)周期：具體需要根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況及實(shí)驗(yàn)內(nèi)容而定。
2.對(duì)實(shí)驗(yàn)有特殊要求，請(qǐng)另詢價(jià)。

3.雙方簽訂合同后，收取50%首付后啟動(dòng)實(shí)驗(yàn)。

七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示

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